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全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在單細(xì)胞測(cè)序中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2022-09-27點(diǎn)擊次數(shù):1203
   單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)目前正應(yīng)用得如火如荼,比如單細(xì)胞RNA測(cè)序(scRNA-seq)和染色質(zhì)轉(zhuǎn)座酶可接近性測(cè)序(ATAC-seq)。與傳統(tǒng)的大量細(xì)胞測(cè)序方法相比,單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)突出了細(xì)胞之間的差異,有助于更深入地了解樣本材料。例如,scRNA-seq能夠比較健康和疾病狀態(tài)下的轉(zhuǎn)錄圖譜,而ATAC-seq能夠說(shuō)明染色質(zhì)可接近性及其對(duì)基因表達(dá)的影響。
  不過(guò),此類(lèi)研究都需要對(duì)分離的細(xì)胞核進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù),因?yàn)槲膸?kù)制備的要求是未裂解細(xì)胞的數(shù)量且樣本中不含細(xì)胞團(tuán)塊和碎片。此外,許多單細(xì)胞基因組學(xué)技術(shù)都需要完整的細(xì)胞核才能正常運(yùn)行。
  細(xì)胞計(jì)數(shù)采用的方法?
  臺(tái)盼藍(lán)染色法
  臺(tái)盼藍(lán)染色是常用的對(duì)死活細(xì)胞進(jìn)行分別計(jì)數(shù)的方法之一,染色原理是臺(tái)盼藍(lán)不能透過(guò)活細(xì)胞完整的細(xì)胞膜,故活細(xì)胞不著色;而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜損傷,染料透過(guò)細(xì)胞膜在細(xì)胞內(nèi)富集而使細(xì)胞著藍(lán)色。不過(guò),臺(tái)盼藍(lán)染色并不一定能準(zhǔn)確分辨有核細(xì)胞和細(xì)胞碎片,因此它往往低估細(xì)胞總數(shù)而高估細(xì)胞活力。
  熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
  吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色原理:活細(xì)胞經(jīng)AO染色發(fā)出綠色熒光,而死細(xì)胞經(jīng)PI染色發(fā)出紅色熒光。重要的是,對(duì)背景復(fù)雜的細(xì)胞,比如說(shuō)外周血單個(gè)核細(xì)胞,含有細(xì)胞碎片較多或成簇的細(xì)胞計(jì)數(shù),避免了細(xì)胞碎片的檢測(cè)。這種方法近也應(yīng)用在單細(xì)胞基因組學(xué)應(yīng)用上,其中綠色對(duì)應(yīng)了完整細(xì)胞,而紅色對(duì)應(yīng)了成功分離的細(xì)胞核。這種策略讓研究人員能夠計(jì)算未裂解的殘留細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比,同時(shí)對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行計(jì)數(shù),提示樣本質(zhì)量,幫助研究人員確定是否繼續(xù)進(jìn)行單細(xì)胞基因組學(xué)流程。
  全自動(dòng)熒光細(xì)胞分析儀明場(chǎng)+雙色熒光通道的結(jié)合使實(shí)驗(yàn)更加簡(jiǎn)單快捷,同時(shí)還具備轉(zhuǎn)染檢測(cè)功能,更加拓寬了檢測(cè)的寬度。檢測(cè)細(xì)胞種類(lèi)更加龐大,不僅適用于單純的培養(yǎng)細(xì)胞,對(duì)從組織中、骨髓中、外周血、肺泡中、肝臟中分離出的種類(lèi)和來(lái)源差異較大的細(xì)胞標(biāo)本,也可以快速的計(jì)數(shù)和分析。通過(guò)熒光標(biāo)記技術(shù)和圖像分類(lèi)識(shí)別技術(shù)對(duì)顯微獲取的熒光數(shù)字圖像自動(dòng)進(jìn)行分析,獲取細(xì)胞的死活狀態(tài)、凋亡情況以及實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分類(lèi)。
  技術(shù)參數(shù):
  1、檢測(cè)模式多樣:非染色計(jì)數(shù)+染色計(jì)數(shù)+雙色熒光計(jì)數(shù)+人工校準(zhǔn)模式+轉(zhuǎn)染
  2、自動(dòng)對(duì)焦,無(wú)需人工干預(yù)調(diào)焦
  3、全自動(dòng)載物臺(tái):可實(shí)現(xiàn)X、Y方向自動(dòng)運(yùn)動(dòng);符合顯微鏡計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn),可自動(dòng)采集4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)面積區(qū)域;
  4、像素:1000萬(wàn)彩色相機(jī);
  5、檢測(cè)細(xì)胞直徑范圍:2-200μm;
  6、測(cè)量細(xì)胞濃度范圍:0.25x104-3×107個(gè)/mL;
  7、可兼容重復(fù)使用標(biāo)準(zhǔn)玻璃計(jì)數(shù)板;
  8、圖像采集:點(diǎn)擊計(jì)數(shù)鍵,儀器自動(dòng)拍攝4個(gè)區(qū)域圖像,自動(dòng)完成采集、存儲(chǔ)功能、識(shí)別、統(tǒng)計(jì)、生成報(bào)告等;圖像可進(jìn)行多通道疊加,圖像可調(diào)節(jié)亮度
  9、具備復(fù)孔計(jì)數(shù)模式:可自動(dòng)獲取同一計(jì)數(shù)片上兩個(gè)樣品槽中的細(xì)胞圖像,軟件自動(dòng)計(jì)算平均值,結(jié)果更精準(zhǔn)
  10、模式識(shí)別功能:細(xì)胞碎片排除分析;成簇細(xì)胞的單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù);不規(guī)則細(xì)胞計(jì)數(shù);提供的數(shù)據(jù)分析圖表包括但不限于:細(xì)胞直徑分析;細(xì)胞直徑均值分析;細(xì)胞大小直方圖;細(xì)胞直徑-亮度散點(diǎn)圖;細(xì)胞直徑-亮度等高線圖;生長(zhǎng)曲線圖;聚團(tuán)分布圖;四個(gè)區(qū)域細(xì)胞原始圖;四個(gè)區(qū)域細(xì)胞死活識(shí)別標(biāo)識(shí)圖;四個(gè)區(qū)域拼接圖;提供拼圖看圖工具,所有計(jì)數(shù)歷史數(shù)據(jù)均可隨時(shí)調(diào)出查看及追溯。
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